western blot中膜的選擇是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵點(diǎn)，Western blot實(shí)驗(yàn)中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC) 和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么區(qū)別呢?怎樣才能選擇最恰當(dāng)?shù)碾s交膜進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)?zāi)?
 

　　NC膜、 PVDF膜 、尼龍膜的特點(diǎn)
 

　　尼龍膜是較理想的核酸固相支持物，有多種類型;硝酸纖維素膜(NC膜)是目前應(yīng)用*的一種固相支持物，便宜;PVDF膜介于二者之間。
 

　　就結(jié)合能力而言：尼龍膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)480-600μg/cm2，可結(jié)合短至10bp的核酸片段;硝酸纖維素膜(NC膜)結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)80-100μg/cm2，對于200bp的核酸片段結(jié)合能力不強(qiáng);PVDF膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)125-300μg/cm2。
 

　　就溫度適應(yīng)性而言：尼龍膜經(jīng)烘烤或紫外線照射后，核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結(jié)合;硝酸纖維素膜(NC膜)依靠疏水性相互作用結(jié)合DNA，結(jié)合不牢固;PVDF膜結(jié)合牢固，耐高溫，特別適合于蛋白印跡。
 

　　就韌性而言：尼龍膜較強(qiáng);硝酸纖維素膜較脆，易破碎;PVDF膜較強(qiáng)。
 

　　就重復(fù)性而言：尼龍膜可反復(fù)用于分子雜交，雜交后，探針分子可經(jīng)堿變性被洗脫下來;硝酸纖維素膜(NC膜)不能重復(fù)使用;PVDF膜可以重復(fù)使用。
 

　　PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有大有小，隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量的蛋白結(jié)合就越牢固。大于20000的蛋白選用0.45um的膜，小于20000的蛋白選用0.2um的膜。PVDF膜在使用是需預(yù)處理，用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團(tuán)，使其更容易與帶負(fù)電的蛋白結(jié)合。PVDF膜具有較高的機(jī)械強(qiáng)度，是印跡法中的理想固相支持物材料。