TC-100培養(yǎng)基是一種常用的昆蟲細胞培養(yǎng)基(如用于果蠅S2細胞、草地貪夜蛾Sf9/Sf21細胞等),主要用于貼壁或懸浮培養(yǎng)昆蟲細胞,支持重組蛋白表達或病毒擴增(如桿狀病毒系統(tǒng))。
TC-100培養(yǎng)基的優(yōu)點:
1.針對性強:專門設(shè)計用于昆蟲細胞培養(yǎng),尤其是鱗翅目昆蟲細胞系,如Sf9細胞、家蠶細胞等,對這些細胞的生長和繁殖具有良好的支持作用,能夠滿足昆蟲細胞特殊的營養(yǎng)需求和生長環(huán)境要求。
2.優(yōu)化病毒生產(chǎn):通過對成分的改良,省略了一些不必要的物質(zhì),更加有利于桿狀病毒毒粒的生產(chǎn),提高了病毒的產(chǎn)量和質(zhì)量,為昆蟲細胞表達系統(tǒng)中重組蛋白的高效表達提供了有力保障,廣泛應(yīng)用于生物制藥領(lǐng)域,如病毒疫苗、抗體藥物的研發(fā)和生產(chǎn)。
3.成分明確:作為一種合成培養(yǎng)基,其成分明確且可控,不含動物血清或其他不明確的生物制品,減少了因血清帶來的污染風(fēng)險,如病毒、支原體等污染物的潛在威脅,同時也避免了血清批次間的差異對實驗結(jié)果的影響,提高了實驗的重復(fù)性和可靠性。
4.使用方便:以液體形式供應(yīng),無需現(xiàn)場配制,節(jié)省了時間和精力,并且減少了配制過程中可能引入的誤差和污染機會。同時,嚴格的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)流程確保了每批產(chǎn)品的質(zhì)量一致性,方便用戶直接使用。
5.穩(wěn)定性好:在適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件下(2-8℃冷藏并避光),保質(zhì)期可達9個月左右,保證了培養(yǎng)基在較長時間內(nèi)的穩(wěn)定性和有效性,降低了因培養(yǎng)基變質(zhì)而導(dǎo)致細胞生長異常的風(fēng)險,也減少了頻繁更換培養(yǎng)基的成本和工作量。
6.可擴展性好:適用于不同規(guī)模的昆蟲細胞培養(yǎng),無論是小規(guī)模的實驗室研究還是大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn),都可以通過調(diào)整培養(yǎng)體積和培養(yǎng)條件來滿足需求,具有良好的可擴展性和靈活性。
TC-100培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)時的注意事項:
-預(yù)熱:使用前將培養(yǎng)基調(diào)至27℃(昆蟲細胞最適溫度),避免低溫刺激細胞。
-換液頻率:貼壁細胞待培養(yǎng)基變黃(pH下降)時換液(約每3~4天一次);懸浮細胞根據(jù)密度調(diào)整(密度>5×10cells/mL時需離心換液)。
-傳代控制:細胞密度不超過1×10cells/mL(過高導(dǎo)致營養(yǎng)耗竭),貼壁細胞用胰酶(0.25EDTA)消化時控制時間(避免損傷)。
-無菌操作:所有操作在生物安全柜中進行,移液器、槍頭嚴格消毒,避免交叉污染。
-定期檢測:長期培養(yǎng)的細胞需定期取樣鏡檢(觀察是否有支原體污染,可用DNA熒光染色法或PCR檢測)。
-重組蛋白表達:若用于桿狀病毒系統(tǒng),感染后需降低培養(yǎng)溫度(如從27℃降至25℃)以延緩細胞裂解,延長蛋白分泌時間。
-懸浮培養(yǎng)優(yōu)化:對于適應(yīng)懸浮的細胞(如Sf9),需調(diào)整攪拌速度(<150rpm)避免剪切力損傷,并監(jiān)測溶氧(DO≥30)。